Synapto-pHluorin - Synapto-pHluorin

Synapto-pHluorin является генетически закодированным оптическим индикатором высвобождения и рециклинга везикул. Он используется в нейробиология изучить выпуск передатчика. Он состоит из pH-чувствительной формы зеленый флуоресцентный белок (GFP) слился с просветной стороной мембранный белок, связанный с пузырьками (ВАМП). При кислом pH внутри везикул трансмиттера синапто-pHфлуорин не флуоресцирует (закаленный ). Когда везикулы высвобождаются, синапто-флюорин попадает в нейтральное внеклеточное пространство, и пресинаптический конец становится ярко флуоресцентным. Следующий эндоцитоз пузырьки снова подкисляются, и цикл может начаться снова. Химическая ощелачивание всех везикул часто используется для нормализации сигналов синапто-флюорина. Synapto-pHluorin иногда состоит из желтый флуоресцентный белок (YFP) для мониторинга цитоплазмы, потому что ее pKа выше, чем GFP (7,1 против 6,0).[1]

История

Synapto-pHluorin был изобретен Геро Мизенбёк в 1998 г.[2]В 2006 году была опубликована улучшенная версия с использованием синаптофизин для нацеливания GFP на везикулы.[3] В 2013 году был представлен двухцветный датчик выброса (ratio-sypHy) для определения размера рециркуляционный бассейн у отдельных синапсов.[4]

Приложения

Synapto-pHluorin в основном используется нейробиологами для изучения высвобождения медиатора и переработка отходов в пресинаптические терминалы.[4] Это также было применено к изучению инсулин секреция в бета-клетки из поджелудочная железа.[5]

Рекомендации

  1. ^ Эшби М.С., Ибараки К., Хенли Дж.М. (2004) Снаружи зеленый цвет: отслеживание белков клеточной поверхности с помощью pH-чувствительного GFP. ТЕНДЕНЦИИ в неврологии 27 (5): 257-61
  2. ^ Miesenböck G, De Angelis DA, Rothman JE (1998) Визуализация секреции и синаптической передачи с помощью pH-чувствительных зеленых флуоресцентных белков. Nature 394 (6689): 192-5.
  3. ^ Granseth B, Odermatt B, Royle SJ, Lagnado L. (2006) Клатрин-опосредованный эндоцитоз является доминирующим механизмом извлечения пузырьков в синапсах гиппокампа. Нейрон 51 (6): 773-86
  4. ^ а б Роза, Тобиас; Шененбергер, Филипп; Джезек, Карел; Эртнер, Томас Г. (2013). «Уточнение развития круговорота пузырьков в коллатеральных синапсах Шаффера». Нейрон. 77 (6): 1109–1121. Дои:10.1016 / j.neuron.2013.01.021. PMID  23522046.
  5. ^ Tsuboi T, Rutter GA (2003) Множественные формы экзоцитоза «поцелуй и беги», выявленные с помощью микроскопии с исчезающими волнами. Curr Biol. 13 (7): 563-7.