Иммунопреципитация - Immunoprecipitation

Иммунопреципитация (IP) это техника осаждающий белок антиген вне решения с помощью антитело который специфически связывается с этим конкретным белком. Этот процесс можно использовать для выделения и концентрирования определенного белка из образца, содержащего многие тысячи различных белков. Иммунопреципитация требует, чтобы антитело было связано с твердым веществом. субстрат в какой-то момент процедуры.

Типы

Индивидуальная иммунопреципитация белков (IP)

Предполагает использование антител, специфичных для известных белок чтобы выделить этот конкретный белок из раствора, содержащего много разных белков. Эти решения часто имеют форму сырой лизат ткани растений или животных. Другими типами образцов могут быть биологические жидкости или другие образцы биологического происхождения.

Иммунопреципитация белкового комплекса (Co-IP)

Иммунопреципитация интактных белковые комплексы (то есть антиген вместе с любыми белками или лигандами, которые с ним связаны) известен как коиммунопреципитация (Co-IP). Co-IP работает путем выбора антитела, которое нацелено на известный белок, который, как считается, является членом более крупного комплекса белков. Ориентируясь на это известен член с антителом может стать возможным вытащить весь белковый комплекс из раствора и тем самым идентифицировать неизвестный участники комплекса.

Это работает, когда белки, участвующие в комплексе, плотно связываются друг с другом, что позволяет вытащить несколько членов комплекса из раствора, зацепившись за один член с помощью антитела. Эту концепцию вытягивания белковых комплексов из раствора иногда называют «вытягиванием». Co-IP - это мощный метод, который регулярно используется молекулярными биологами для анализа белок-белковые взаимодействия.

  • Конкретное антитело часто выбирает субпопуляцию своего целевого белка, которая имеет эпитоп подвергались воздействию, что не позволяло идентифицировать какие-либо белки в комплексах, которые скрывают эпитоп. Это можно увидеть в том, что редко удается преципитировать даже половину данного белка из образца с одним антителом, даже если используется большой избыток антитела.
  • По мере того, как происходят последовательные раунды нацеливания и иммунопреципитации, количество идентифицированных белков может продолжать расти. Идентифицированные белки могут никогда не существовать в едином комплексе в данный момент времени, а вместо этого могут представлять собой сеть белков, взаимодействующих друг с другом в разное время для разных целей.
  • Повторение эксперимента, направленное на различных членов белкового комплекса, позволяет исследователю дважды проверить результат. Каждый раунд извлечения должен приводить к восстановлению как исходного известного белка, так и других ранее идентифицированных членов комплекса (и даже новых дополнительных членов). Повторяя таким образом иммунопреципитацию, исследователь проверяет, что каждый идентифицированный член белкового комплекса был достоверной идентификацией. Если конкретный белок может быть восстановлен только путем нацеливания на одного из известных членов, но не путем нацеливания на других известных членов, то статус этого белка как члена комплекса может быть предметом сомнения.

Иммунопреципитация хроматина (ChIP)

Рабочий процесс ChIP-секвенирования

Иммунопреципитация хроматина (ChIP) - это метод, используемый для определения местоположения ДНК сайты привязки на геном для конкретного белок представляет интерес. Этот метод дает представление о взаимодействиях белок-ДНК, происходящих внутри ядра живых организмов. клетки или ткани. В in vivo Природа этого метода отличается от других подходов, традиционно используемых для ответа на те же вопросы.

Принцип, лежащий в основе этого анализа, заключается в том, что ДНК-связывающие белки (включая факторы транскрипции и гистоны ) в живых клетках может быть сшитый к ДНК, которую они связывают. Используя антитело, специфичное к предполагаемому ДНК-связывающему белку, можно иммунопреципитировать комплекс белок-ДНК из клеточных лизатов. В сшивание часто достигается применением формальдегид к клеткам (или ткани), хотя иногда полезно использовать более определенный и постоянный сшивающий агент, такой как DTBP. После сшивки клетки лизированный и ДНК разбивается на части длиной 0,2–1,0 т.п.н. обработка ультразвуком. На этом этапе проводится иммунопреципитация, приводящая к очистке комплексов белок-ДНК. Очищенные комплексы белок-ДНК затем нагревают, чтобы обратить вспять формальдегидное сшивание белков и комплексов ДНК, позволяя отделить ДНК от белков. Идентичность и количество выделенных фрагментов ДНК затем можно определить с помощью ПЦР. Ограничение проведения ПЦР на выделенных фрагментах состоит в том, что необходимо иметь представление о том, на какую геномную область нацелена цель, чтобы получить правильные праймеры для ПЦР. Иногда это ограничение удается обойти, просто клонируя изолированную геномную ДНК в плазмидный вектор а затем с использованием праймеров, специфичных для области клонирования этого вектора. В качестве альтернативы, если кто-то хочет найти, где белок связывается в масштабе всего генома, Чип-секвенирование используется и недавно стала стандартной технологией, которая может локализовать сайты связывания белков с высокой пропускной способностью и рентабельностью, позволяя также охарактеризовать цистром. Ранее, Микрочип ДНК также использовался (ChIP-on-chip или ChIP-chip ).

RNP иммунопреципитация (RIP)

Подобно иммунопреципитации хроматина (ChIP), описанной выше, но вместо нацеливания на ДНК-связывающие белки, как в ChIP, цели иммунопреципитации RNP рибонуклеопротеины (РНП).[1] Сначала лизируются живые клетки, а затем целевой белок и связанная с ним РНК иммунопреципитируются с использованием антитела, нацеленного на интересующий белок. Очищенные комплексы РНК-белок можно разделить, выполнив экстракцию РНК, и идентичность РНК может быть определена с помощью кДНК секвенирование[2] или же ОТ-ПЦР. Некоторые варианты RIP, например PAR-CLIP включают стадии сшивания, которые затем требуют менее тщательных условий лизиса.

Меченые белки

Pull down анализ с использованием меченых белков

Одним из основных технических препятствий при иммунопреципитации является большая сложность создания антитела, которое нацелено на единственный известный белок. Чтобы обойти это препятствие, многие группы разработают теги на C- или N-конец интересующего белка. Преимущество здесь в том, что одну и ту же метку можно использовать снова и снова для многих разных белков, и исследователь может каждый раз использовать одно и то же антитело. Преимущества использования меченых белков настолько велики, что этот метод стал обычным для всех типов иммунопреципитации, включая все типы IP, описанные выше. Примеры используемых тегов: Зеленый флуоресцентный белок (GFP) тег, Глутатион-S-трансфераза (GST) и тег ФЛАГ-тег тег. Хотя использование тега для включения раскрывающихся списков удобно, это вызывает некоторые опасения относительно биологической значимости, поскольку сам тег может либо скрывать нативные взаимодействия, либо вводить новые и неестественные взаимодействия.

Методы

Двумя общими методами иммунопреципитации являются метод прямого захвата и метод непрямого захвата.

Прямой

Антитела, специфичные для определенного белка (или группы белков), иммобилизованы на твердофазном субстрате, таком как суперпарамагнитный микрошарики или на микроскопическом агароза (немагнитные) бусины. Затем к смеси белков добавляют шарики со связанными антителами, и белки, на которые нацелены антитела, захватываются на шариках через антитела; другими словами, они становятся иммунопреципитированными.

Косвенный

Антитела, специфичные для определенного белка или группы белков, добавляются непосредственно к смеси белков. Антитела еще не прикреплены к твердофазной подложке. Антитела могут свободно плавать вокруг смеси белков и связывать свои мишени. Со временем шарики, покрытые белок A / G добавляются к смеси антитела и белка. На этом этапе антитела, которые теперь связаны со своими мишенями, будут прилипать к шарикам.

С этого момента прямой и косвенный протоколы сходятся, потому что образцы теперь имеют одинаковые ингредиенты. Оба метода дают одинаковый конечный результат с белком или белковыми комплексами, связанными с антителами, которые сами иммобилизованы на шариках.

Выбор

Непрямой подход иногда предпочтителен, когда концентрация белка-мишени низкая или когда специфическое сродство антитела к белку является слабым. Непрямой метод также используется, когда кинетика связывания антитела с белком является медленной по разным причинам. В большинстве случаев прямой метод является предпочтительным и по умолчанию.

Технический прогресс

Агароза

Исторически твердофазная подложка для иммунопреципитации, используемая большинством ученых, была высокопористой. агароза бусы (также известные как смолы или суспензии агарозы). Преимущество этой технологии заключается в очень высокой потенциальной связывающей способности, так как практически вся губчатая структура агарозной частицы (размером от 50 до 150 мкм) доступна для связывания антител (которые, в свою очередь, будут связывать целевые белки) и использования стандартного лабораторного оборудования для всех аспектов протокола IP без необходимости использования специального оборудования. Преимущество чрезвычайно высокой связывающей способности должно быть тщательно сбалансировано с количеством антител, которое исследователь готов использовать для покрытия гранул агарозы. Поскольку антитела могут быть фактором, ограничивающим затраты, лучше рассчитывать в обратном направлении. из количество белка, которое необходимо уловить (в зависимости от последующего анализа), к количество антитела, которое требуется для связывания этого количества белка (с небольшим избытком, добавленным для учета неэффективности системы), и еще больше к количество агарозы, необходимое для связывания этого конкретного количества антитела. В случаях, когда насыщение антителами не требуется, эта технология не имеет себе равных по способности захватывать чрезвычайно большие количества захваченных белков-мишеней. Предостережение здесь в том, что «преимущество большой емкости» может стать «недостаток большой емкости» это проявляется, когда огромная связывающая способность сефароза / гранулы агарозы не полностью насыщены антителами. Часто бывает, что количество антител, доступное исследователю для эксперимента по иммунопреципитации, меньше, чем достаточно для насыщения гранул агарозы, используемых при иммунопреципитации. В этих случаях исследователь может получить частицы агарозы, которые только частично покрыты антителами, и часть связывающей способности гранул агарозы, которая не покрыта антителами, затем может свободно связывать все, что будет прилипать, что приводит к увеличению фоновый сигнал из-за неспецифического связывания компонентов лизата с гранулами, что может затруднить интерпретацию данных. Хотя некоторые могут возразить, что по этим причинам разумно сопоставить количество агарозы (с точки зрения связывающей способности) с количеством антитела, которое человек желает связать для иммунопреципитации, простой способ уменьшить проблему неспецифических связывание с гранулами агарозы и повышение специфичности должно преклирировать лизат, что настоятельно рекомендуется для любой иммунопреципитации.[3][4]

Предварительная очистка

Лизаты представляют собой сложные смеси белков, липидов, углеводов и нуклеиновых кислот, и следует предположить, что некоторое количество неспецифического связывания с IP-антителом, белком A / G или подложкой в ​​форме гранул будет происходить и отрицательно влиять на обнаружение иммунопреципитированной мишени. (s). В большинстве случаев, предварительная очистка лизат в начале каждого эксперимента по иммунопреципитации (см. шаг 2 в разделе «Протокол» ниже)[5] представляет собой способ удаления потенциально реактивных компонентов из клеточного лизата перед иммунопреципитацией для предотвращения неспецифического связывания этих компонентов с IP-гранулами или антителом. Основная процедура предварительной очистки описана ниже, при этом лизат инкубируют только с шариками, которые затем удаляют и выбрасывают перед иммунопреципитацией.[5] Однако этот подход не учитывает неспецифическое связывание с IP-антителом, которое может быть значительным. Следовательно, альтернативный метод предварительной очистки заключается в инкубации белковой смеси с точно такими же компонентами, которые будут использоваться при иммунопреципитации, за исключением того, что нецелевое, нерелевантное антитело того же подкласса антител, что и IP-антитело, используется вместо IP-антитела. само антитело.[4] Этот подход пытается использовать как можно более близкие к точным условиям и компонентам IP, как и фактическую иммунопреципитацию, для удаления любого неспецифического клеточного компонента без захвата целевого белка (если, конечно, целевой белок неспецифично не связывается с каким-либо другим компонентом IP, что следует должным образом контролировать, анализируя отброшенные шарики, используемые для преклификации лизата). Затем целевой белок может быть иммунопреципитирован с уменьшенным риском неспецифического связывания, мешающего интерпретации данных.

Суперпарамагнитные бусы

Хотя подавляющее большинство иммунопреципитации выполняется с помощью гранул агарозы, использование суперпарамагнитный шарики для иммунопреципитации - это гораздо более новый подход, который только недавно набирает популярность в качестве альтернативы агарозным шарикам для IP приложений. В отличие от агарозы, магнитные шарики твердые и могут быть сферическими, в зависимости от типа шарика, а связывание антител ограничено поверхностью каждой шарика. Хотя эти шарики не обладают преимуществом пористого центра для увеличения связывающей способности, магнитные шарики значительно меньше, чем шарики агарозы (от 1 до 4 мкм), и большее количество магнитных шариков на объем, чем шарики агарозы, в совокупности дает магнитным шарикам эффективную эффективность. отношение площади поверхности к объему для оптимального связывания антител.

Имеющиеся в продаже магнитные шарики могут быть разделены по однородности размера на монодисперсный и полидисперсный бусы. Монодисперсный бусы, также называемые микрошарики, демонстрируют точную однородность, и поэтому все шарики обладают идентичными физическими характеристиками, в том числе связывающей способностью и уровнем притяжения к магнитам. Полидисперсные шарики, хотя и близки по размеру к монодисперсным шарикам, демонстрируют широкий диапазон изменчивости размера (от 1 до 4 мкм), который может влиять на их связывающую способность и магнитный захват. Хотя оба типа гранул коммерчески доступны для иммунопреципитации, более высокое качество монодисперсный суперпарамагнитный шарики больше подходят для автоматических протоколов из-за их постоянного размера, формы и характеристик. Монодисперсный и полидисперсный суперпарамагнитный бусы предлагают многие компании, в том числе Invitrogen, Thermo Scientific, и Millipore.

Агароза против магнитных шариков

Сторонники магнитных шариков утверждают, что шарики обладают более высокой скоростью связывания с белками.[6][7][8] над агарозными гранулами для иммунопреципитации, хотя стандартные иммунопреципитации на основе агарозных гранул выполнялись за 1 час.[4] Также были сделаны заявления о том, что магнитные шарики лучше подходят для иммунопреципитации чрезвычайно крупных белковых комплексов из-за полного отсутствия верхнего предела размера для таких комплексов,[6][7][9] хотя объективных свидетельств, подтверждающих это утверждение, нет. Природа технологии магнитных шариков приводит к меньшему количеству операций с образцами[7] из-за снижения физической нагрузки на образцы магнитной сепарации по сравнению с повторным центрифугированием при использовании агарозы, что может в значительной степени способствовать увеличению выхода лабильных (хрупких) белковых комплексов.[7][8][9] Однако при выборе поддержки иммунопреципитации следует учитывать дополнительные факторы, такие как связывающая способность, стоимость реагента, потребность в дополнительном оборудовании и возможность автоматизировать процессы IP.

Связующая способность

Сторонники как агарозных, так и магнитных шариков могут спорить, способствует ли огромная разница в связывающей способности двух шариков одному конкретному типу шариков. При сравнении гранул с гранулами гранулы агарозы имеют значительно большую площадь поверхности и, следовательно, большую связывающую способность, чем магнитные гранулы, из-за большого размера гранул и губчатой ​​структуры. Но переменный размер пор агарозы вызывает потенциальный верхний предел размера, который может повлиять на связывание чрезвычайно больших белков или белковых комплексов с внутренними сайтами связывания, и поэтому магнитные шарики могут быть лучше подходят для иммунопреципитации больших белков или белковых комплексов, чем шарики агарозы. хотя независимых сравнительных свидетельств, подтверждающих оба этих случая, нет.

Некоторые утверждают, что значительно большая связывающая способность гранул агарозы может быть недостатком из-за большей способности неспецифического связывания. Другие могут выступать за использование магнитных шариков из-за того, что для насыщения общей связывающей способности шариков агарозы требуется большее количество антител, что, очевидно, было бы экономическим недостатком использования агарозы. Хотя эти аргументы верны вне контекста их практического использования, эти аргументы игнорируют два ключевых аспекта принципа иммунопреципитации, который демонстрирует, что решение использовать агарозу или магнитные шарики не определяется просто связывающей способностью.

Во-первых, неспецифическое связывание не ограничивается сайтами связывания антител на иммобилизованной подложке; любая поверхность антитела или компонента реакции иммунопреципитации может связываться с неспецифическими составляющими лизата, и, следовательно, неспецифическое связывание все равно будет происходить даже при использовании полностью насыщенных гранул. Вот почему важно предварительно очистить образец перед проведением иммунопреципитации.

Во-вторых, способность захватывать целевой белок напрямую зависит от количества используемого иммобилизованного антитела, и, следовательно, при параллельном сравнении агарозы и иммунопреципитации на магнитных гранулах, большая часть белка, который может захватить любая из подложек, ограничена количество добавленного антитела. Таким образом, решение о насыщении любого типа поддержки зависит от количества необходимого белка, как описано выше в разделе «Агароза» на этой странице.

Расходы

Стоимость использования любого типа поддержки является ключевым определяющим фактором при использовании агарозы или магнитных шариков для иммунопреципитации. Типичный на первый взгляд расчет стоимости магнитных шариков по сравнению с сефароза шарики могут сделать шарики сефарозы менее дорогими. Но магнитные шарики могут иметь конкурентоспособную цену по сравнению с агарозой для иммунопреципитации в аналитическом масштабе в зависимости от используемого метода IP и объема шариков, необходимого для реакции IP.

При использовании традиционного периодического метода иммунопреципитации, как указано ниже, когда все компоненты добавляются в пробирку во время IP-реакции, физические характеристики обработки агарозных гранул требуют минимального количества гранул для каждого IP-эксперимента (обычно в диапазоне от 25 до 50 мкл. бусинки на ИП). Это связано с тем, что шарики сефарозы должны быть сконцентрированы на дне пробирки путем центрифугирования, а супернатант удаляется после каждой инкубации, промывки и т. Д. Это налагает абсолютные физические ограничения на процесс, поскольку осадки шариков агарозы менее 25-50 мкл затруднены, если не невозможно визуально идентифицировать на дне пробирки. Для магнитных шариков не требуется минимального количества шариков из-за магнитной обработки, и поэтому, в зависимости от целевого антигена и IP-антитела, можно использовать значительно меньше магнитных шариков.

И наоборот, спин-колонки можно использовать вместо обычных микроцентрифужных пробирок для значительного уменьшения количества гранул агарозы, необходимых для реакции. Спин-колонки содержат фильтр, который позволяет всем компонентам IP, за исключением гранул, проходить через короткое центрифугирование и, следовательно, обеспечивает метод использования значительно меньшего количества гранул агарозы с минимальными потерями.

Оборудование

Как упоминалось выше, для использования гранул агарозы в иммунопреципитации требуется только стандартное лабораторное оборудование, в то время как для IP-реакций на основе магнитных гранул требуются мощные магниты. Хотя оборудование для магнитного захвата может быть дорогостоящим, быстрое завершение иммунопреципитации с использованием магнитных шариков может быть финансово выгодным подходом, когда наступает срок выплаты грантов, поскольку 30-минутный протокол с магнитными шариками по сравнению с ночной инкубацией при 4 ° C с шариками агарозы может привести к созданию большего количества данных за более короткий промежуток времени.[6][7][8]

Автоматизация

Дополнительным преимуществом использования магнитных шариков является то, что автоматические устройства для иммунопреципитации становятся все более доступными. Эти устройства не только сокращают объем работы и время для выполнения IP-адреса, но также могут использоваться для высокая пропускная способность Приложения.

Резюме

Хотя очевидные преимущества использования магнитных шариков включают повышенную скорость реакции, более бережное обращение с образцами и возможность автоматизации, выбор использования агарозы или магнитных шариков в зависимости от связывающей способности поддерживающей среды и стоимости продукта может зависеть от представляющий интерес белок и используемый метод IP. Как и во всех анализах, требуется эмпирическое тестирование, чтобы определить, какой метод является оптимальным для данного приложения.

Протокол

Фон

После выбора технологии гранул твердого субстрата антитела связываются с гранулами, и гранулы, покрытые антителами, могут быть добавлены к образцу гетерогенного белка (например, гомогенизированной ткани). На этом этапе антитела, иммобилизованные на гранулах, будут связываться с белками, которые они специфически распознают. Как только это произошло, часть протокола иммунопреципитации фактически завершена, поскольку конкретные интересующие белки связываются с антителами, которые сами иммобилизованы на шариках. Отделение иммунокомплексов от лизата является чрезвычайно важной серией этапов, поскольку белок (белки) должны оставаться связанными друг с другом (в случае ко-IP) и связываться с антителом во время этапов отмывки, чтобы удалить несвязанные белки и уменьшают фон.

При работе с гранулами агарозы гранулы должны быть выделены из образца путем кратковременного вращения в центрифуге с усилием от 600 до 3000 x g (умноженное на стандартную силу тяжести). Этот этап может быть выполнен в стандартной микроцентрифужной пробирке, но для более быстрого разделения, большей консистенции и более высокого извлечения процесс часто выполняется в небольших центрифугах с размером пор, позволяющим проходить жидкости, но не гранулам агарозы. После центрифугирования гранулы агарозы образуют очень рыхлый пушистый осадок на дне пробирки. Супернатант, содержащий загрязнения, можно аккуратно удалить, чтобы не повредить шарики. Затем к шарикам может быть добавлен промывочный буфер, и после смешивания шарики снова разделяются центрифугированием.

В случае суперпарамагнитных шариков образец помещают в магнитное поле так, чтобы шарики могли собираться на стороне пробирки. Эта процедура обычно длится примерно 30 секунд, и оставшаяся (нежелательная) жидкость удаляется пипеткой. Промывка осуществляется путем ресуспендирования шариков (с магнита) в промывочном растворе и последующего концентрирования шариков на стенке пробирки (путем помещения пробирки обратно на магнит). Обычно промывку повторяют несколько раз, чтобы обеспечить надлежащее удаление загрязнений. Если суперпарамагнитные шарики однородны по размеру и магнит спроектирован должным образом, шарики будут равномерно концентрироваться на стороне пробирки, и промывочный раствор можно будет легко и полностью удалить.

После промывания осажденный белок (белки) элюируется и анализируется с помощью гель-электрофорез, масс-спектрометрии, вестерн-блоттинг или любое количество других методов идентификации составляющих в комплексе. Время протокола иммунопреципитации сильно различается из-за множества факторов, причем время протокола увеличивается с количеством необходимых промывок или с более медленной кинетикой реакции пористых гранул агарозы.

Шаги

  1. Лизируйте клетки и подготовьте образец для иммунопреципитации.
  2. Предварительно очистите образец, пропустив образец только через шарики или связанный с нерелевантным антителом, чтобы впитать любые белки, которые неспецифически связываются с компонентами IP.
  3. Инкубируйте раствор с антителом против интересующего белка. Антитело можно прикрепить к твердой подложке до этого этапа (прямой метод) или после этого этапа (непрямой метод). Продолжайте инкубацию, чтобы образовались комплексы антитело-антиген.
  4. Осаждать интересующий комплекс, удаляя его из основного раствора.
  5. Осажденный комплекс промыть несколько раз. Вращайте каждый раз между промывками при использовании шариков агарозы или поместите пробирку на магнит при использовании суперпарамагнитных шариков, а затем удалите супернатант. После окончательной промывки удалите как можно больше супернатанта.
  6. Элюируйте белки с твердой подложки, используя буфер для загрузки образцов с низким pH или SDS.
  7. Проанализируйте интересующие комплексы или антигены. Это можно сделать разными способами:
    1. SDS-СТРАНИЦА (додецилсульфат натрия-полиакриламид гель-электрофорез ) с последующим окрашиванием гелем.
    2. SDS-СТРАНИЦА с последующим: окрашивание геля, вырезание отдельных окрашенных полос белка и секвенирование белков в полосах путем МАЛДИ -Масс-спектрометрии
    3. Трансфер и Вестерн-блоттинг с использованием другого антитела для белков, которые взаимодействуют с антигеном, с последующим обнаружением с использованием хемилюминесцентного или флуоресцентного вторичного антитела.

Рекомендации

  1. ^ Кин Дж. Д., Комисаров Дж. М., Фридерсдорф МБ (2006). «RIP-Chip: выделение и идентификация мРНК, микроРНК и белковых компонентов рибонуклеопротеидных комплексов из клеточных экстрактов». Нат Проток. 1 (1): 302–7. Дои:10.1038 / nprot.2006.47. PMID  17406249. S2CID  25925403.
  2. ^ Сэнфорд Дж. Р., Ван Х, Морт М. и др. (Март 2009 г.). «Фактор сплайсинга SFRS1 распознает функционально разнообразный ландшафт транскриптов РНК». Genome Res. 19 (3): 381–94. Дои:10.1101 / гр.082503.108. ЧВК  2661799. PMID  19116412.
  3. ^ Бонифачино, Дж. С., Делл'Анджелика, Э. С. и Спрингер, Т. А. 2001. Иммунопреципитация. Текущие протоколы в молекулярной биологии. 10.16.1–10.16.29.
  4. ^ а б c Розенберг, Ян (2005). Анализ и очистка белков: настольные методы. Springer. п. 520. ISBN  978-0-8176-4340-9.
  5. ^ а б Crowell RE, Du Clos TW, Montoya G, Heaphy E, Mold C (ноябрь 1991 г.). «Рецепторы C-реактивного белка на линии моноцитарных клеток человека U-937. Доказательства дополнительного связывания с Fc gamma RI». Журнал иммунологии. 147 (10): 3445–51. PMID  1834740.
  6. ^ а б c Альбер Ф., Докудовская С., Винхофф Л.М. и др. (Ноябрь 2007 г.). «Молекулярная архитектура комплекса ядерных пор». Природа. 450 (7170): 695–701. Bibcode:2007Натура.450..695А. Дои:10.1038 / природа06405. PMID  18046406. S2CID  4431057.
  7. ^ а б c d е Альбер Ф., Докудовская С., Винхофф Л.М. и др. (Ноябрь 2007 г.). «Определение архитектур макромолекулярных сборок». Природа. 450 (7170): 683–94. Bibcode:2007Натура.450..683А. Дои:10.1038 / природа06404. PMID  18046405. S2CID  2171750.
  8. ^ а б c Кристя И.М., Уильямс Р., Чейт Б.Т., член парламента от Rout (декабрь 2005 г.). «Флуоресцентные белки как протеомные зонды». Молекулярная и клеточная протеомика. 4 (12): 1933–41. Дои:10.1074 / mcp.M500227-MCP200. PMID  16155292.
  9. ^ а б Нипель М., Страмбио-де-Кастилия С., Фасоло Дж., Чайт Б.Т., член парламента от Rout (июль 2005 г.). «Белок, связанный с комплексом ядерной поры, Mlp2p, связывается с телом полюса веретена дрожжей и способствует его эффективной сборке». Журнал клеточной биологии. 170 (2): 225–35. Дои:10.1083 / jcb.200504140. ЧВК  2171418. PMID  16027220.

внешняя ссылка

Библиотечные ресурсы о
Иммунопреципитация